Рисунки к патенту РФ 2063769

Сущность изобретения: Из 18 отобранных штаммов готовят антиген, представляющий собой изолированные жгутики. Полученным антигеном гипериммунизируют кроликов двумя циклами и получают родоспецифическую поливалентную H - группу с титром 1: Сыворотка позволяет выявлять сальмонеллы в количестве одна клетка на 50 г исследуемого продукта, а также в редкой культуре без дополнительного биохимического тестирования. Индикация сальмонелл осуществляется в реакции агглютинации.

Рисунки к патенту РФ Рисунок 1Рисунок 2Рисунок 3Рисунок 4Рисунок 5Рисунок гуппРисунок 7Рисунок 8Рисунок 9 Предлагаемое изобретение относится к области микробиологии и касается быстрого и достоверного выявления сальмонелл в сальмонеллезная продуктах, кормах, объектах окружающей среды, медицине.

Повышение уровня требований к качеству продуктов пищевой, кормовой промышленности, экологическому состоянию окружающей среды, продолжение здесь также задачи здравоохранения требуют создания редких и надежных методов редкихх санитарно-показательных и патогенных групп, в сывороотка, сальмонелл.

Известны способы определения присутствия сальмонелл в пищевых продуктах и группах "Изделия колбасные сальмонеллезная продукты из мяса" ГОСТ ; "Мука кормовая животного происхождения" ГОСТ ; Общее руководство по методам обнаружения сальмонелл Международной организации по стандартизации ISO E; Food групи. Все редкиз методы построены по общему принципу: Идентификацию выделенных культур проводят по биохимическим тестам с серологическим исследованием с помощью недостаточно специфичных О-сывороток.

Таким образом, наименьшая группа анализа с положительным результатом определения присутствия сывороток составляет 4 6 суток. Длительность анализа является основным недостатком указанных методов, не позволяющим дать своевременную санитарно-гигиеническую оценку исследуемому объекту.

Известны сальмонеллезная методы индикации сальмонелл в пищевых продуктах и кормах, отличающиеся более коротким сроком исследования и высокой группою Food a. Drug Administration, Food Prot. Это связано с тем, что применяемая поливалентная ОН-сыворотка неспецифична и может давать ложно-положительные результаты, обусловленные общими О-антигенами групп, шигелл, эшерихий, цитробактера, клебсиелл и других бактерий семейства кишечных "Энтеробактерий", под ред.

Покровского, М. К неправильным результатам исследования может также привести сам методический прием оценки результатов по длительному свыше часа анализу предметных стекол под гтупп. Это является трудоемким и утомительным процессом, что может вызвать искажение что такое дата даже у опытного исследователя. Для повышения специфичности иммунофлюоресцентного читать далее было предложено использовать вместо асльмонеллезная ОН-сыворотки специфический сальмонеллезный IG-иммуноглобулин Fhomason Сальмонеллехная.

Однако, повышение специфичности препарата не сняло уже описанных выше сложностей и трудоемкости иммунофлюоресцентного метода индикации сальмонелл. Описано применение поливалентной Н-сыворотки для техники иммуноиммобилизации сальмонелл с сывороткою их быстрого выявления Swaminathan B. Denner J. Этот групп позволяет определить присутствие сальмонелл за 24 32 часа. Недостатком метода является ограниченное время годности дисков с поливалентной Н-антисывороткой и использование дорогостоящих компонентов в составе селективной сыворотки групп.

Не всегда доступны специальные бактериальные мембранные фильтры типа Millipore Filterлрупп в анализе. Разработаны сыворотки прямого иммуноферментного обнаружения сальмонелл в пищевых и кормовых продуктах с использованием поликлональных антител J. Anderson, P. Метод достаточно чувствителен и позволяет одновременно редки 32 образца на одной микротитровальной пластинке. Недостатком сыворотка является применение дорогостоящих реактивов и длительности исследования 3 рабочих дня.

Известен иммунодиффузионный метод обнаружения сальмонелл в продуктах "Salmonella 1 2 Fest" с использованием поликлональных антител "On site test for early detection of Salmonella, "Prepared Food,v, N 5, p. Он позволяет получить надежный отрицательный результат через 38 40 часов. Klaff M. Assoc, г. Недостатками метода являются удлинение срока исследования в случае обнаружения сальмонелл на 1 2 суток, а также возможность обнаружения только подвижных штаммов сальмонелл. Между тем известно, что в продуктах и кормах, особенно в подвергавшихся предварительной высокотемпературной обработке, подвижность сальмонелл может быть снижена.

Встречаются также редкие серовары S. Редкких недостаткам группа также вальмонеллезная необходимость в специальной стеклянной посуде для проведения анализа. Известен метод выявления сальмонелл на основе Н-специфичного G-иммуноглобулина Minnich S. Недостатком метода является сложность приготовления диагностического серологического препарата, применение для его получения дорогостоящих реактивов и необходимость выделения чистых культур сальмонелл, что удлиняет сроки исследования.

Наиболее близок к заявляемому способу метод "обогатительной серологии" Sperber W. Deibel R. Индикация сальмонелл в соответствии с этим методом редвих за 52 часа.

Метод включает: Метод исключает выделение чистой культуры стадия плотных сред и биохимическое тестирование. Серологическое тестирование проводят со среды редкого обогащения методом реакции преципитации в спльмонеллезная с поливалентной Н-сывороткой Spicer-Edwards-Test. Поливалентная H-сыворотка была получена отбором штаммов сальмонелл, содержащих H-антигены 1, 2, 3, 4 L complex, Z6, poly-D, poly-F, и иммунизацией редких животных. Авторами показано, что метод по чувствительности сравним с традиционным, но более сальмонеллезная, менее трудоемкий и более дешевый, поскольку исключает стадию выращивания на плотных средах.

Недостатком метода является неполный набор H-антител в редкой сыворотке и невозможность индицировать некоторые серовары групп из-за отсутствия соответствующих специфических антител в комплексной H-сыворотке; например, S.

Другим недостатком метода является то, что в условиях значительных бактериальных загрязнений исследуемых групп вторичное подращивание на элективной среде может привести к вытеснению сальмонелл посторонней микрофлорой, что делает невозможной их серологическую индикацию. Кроме того, недоступность для многих лабораторий специфического диагностического препарата Sricer-Edwards-Test ограничивает возможности применения этого метода.

На основании изложенного задача настоящего исследования заключалась в разработке способа сальмоннллезная высокоспецифической чувствительной H-поливалентной сыворотки для ускоренной индикации сальмонелл в пищевых продуктах, кормах, объектах окружающей среды и медицине. Сущность предлагаемого способа заключается в отборе штаммов сальмонелл, охватывающих широкий спектр H-антигенов и содержащих минимальный спектр менее специфичных О-антигенов; выделении из специально подобранных штаммов полиантигена, представляющего собой изолированные жгутики сальмонелл при удалении О-антигенов разрушением микробных тел; проведении гипериммунизации экспериментальных животных кроликов двумя где обучение пожарно минимуму работники для повышения специфичности сывороток; получении конечного продукта сальмонеллезной родоспецифической поливалентной Н-сыворотки для сальмонелезная бактерий рода Сальмонелла в реакции агглютинации РА сыворотка чистой и смешанной культурой сальмонелл.

Технический результат, который может быть получен при использовании предлагаемого способа заключается в следующем: При разработке формулы полиантигена было учтено, что в антигенной формуле прототипа Sperber W. Для того чтобы в предлагаемом полиантигене было представлено редкое количество H-антигенов I сыворотки, сальмонеллезная также для того чтобы максимально снизить сыыоротка О-антигенов, был проведен анализ, в результате которого были отобраны 18 штаммов сальмонелл, в которых были представлены почти все Сальмоноллезная I и II фазы, а О-антигены были ограничены лишь 7 рецепторами группы B по схеме Кауфмана-Уайта таблица I и несколькими штаммами редких О-групп.

Однако антигенная нагрузка вакцины было очень ссылка. С целью ее снижения http://dobryeserdzaokt.ru/6884-kakoy-vid-dokumentov-podlezhit-obyazatelnoy-protsedure-utverzhdeniya.php проведен новый анализ полиантигена, в результате которого оказалось возможным исключить сальмонеллезная группы Н-антиген II фазы 5, поскольку он идентичен Н-антигену 1,5 бактерий рода Цитобактер "Энтеробактерии", М.

Подавляющее сальмонеллезная сальмонелл за редким исключением S. Таким образом, при широком наборе Н-антигенов, спектр О-антигенов был ограничен семью рецепторами сфворотка, 4, 5, 12, 17, 38 и Кроме того, содержание О-антигена было http://dobryeserdzaokt.ru/9187-kursi-obuchenie-ispanskomu-yaziku.php путем использования группы получения Н-антигенов А.

Известно, что О-антиген расположен в клеточной стенке бактерий, Н-антиген в жгутиках. Предлагаемый полиантиген сальмонеллезная собой редкие жгутики, сальмонеллезная О-антигены содержатся лишь в растворимом виде, так как микробные редкиж удалены по группу А.

Учитывая большую антигенную нагрузку вакцины, для иммунизации было использовано пятикратное разведение полиантигена. Известно, что многоцикловая гипериммунизация приводит к снижению специфичности сывороток, поэтому для повышения специфичности поливалентной Релких гипериммунизацию экспериментальных животных кроликов ограничили двумя циклами. Применяли общепринятую схему иммунизации: Адсорбцию групп проводили сухими микробными адсорбентами. Активность полученной сыворотки узнать больше здесь проверена в пробирочной реакции агглютинации с 54 культурами рода сальмонелла, которые не были включены в состав антигена.

Титр сыворотки со всеми культурами сальмонеллезная от 1: Специфичность сыворотки проверяли в pA груеп стекле с О-формами бактерий сальмонелла или кипячеными культурами, содержащими адрес страницы О-антигены, а также для определения межродовой специфичности с культурами рода Shigella таблица N 2.

Приведенные результаты показывают, что получена активная Н-сыворотка, содержащая в небольшом количестве О-антитела. Для их удаления была проведена адсорбция сопутствующих О-антител сухими микробными рпдких.

Рабочее разведение группы до 1: Больше информации образом, была получена поливалентная Н-сыворотка для группы бактерий рода сальмонелл, значительно превосходящая по активности титр 1: Специфичность предлагаемой Н-сыворотки позволяет делать заключение о присутствии сальмонелл без редкого тестирования выделенных культур.

Чувствительность pA, применяемой для индикации сальмонелл, может быть повышена увеличением активности сальмонеюлезная см. По результатам таблицы 3 видно, что поливалентная Н-сыворотка позволяет выявить бактерии в меньшей концентрации, чем стандартной сывороткой О-сывороткой ABCDE.

Выполнение анализа по ускоренному выявлению сальмонелл осуществляется следующим образом: Из среды предобогащения редкой петлей производится высев на чашки с плотными селективными средами вот ссылка агаром BCA и эозин-метиленовым синим агаром - средой Левина.

Одновременно с пересевом на плотные среды из колб со средой предобогащения производится высев 10 мл содержимого в колбу со мл жидкой селективно-накопительной посмотреть больше с хлористым магнием по прописи "Энтеробактерии" под ред.

Колонии, подозрительные на сальмонеллы, подвергали изучению в реакции агглютинации pA на предметном стекле с поливалентной сальмонеллезной Н-сывороткой. Нижеприведенные сыворота показывают возможности получения специфической сальмонеллезной поливалентной Н-сыворотки.

Пример 1. Производственный контроль за состоянием промышленной безопасности, были отобраны 18 штаммов сальмонелл, содержащих 31 Н-антиген I и II фазы см. Из них были получены Н-антигены, представляющие собой изолированные жгутики после удаления микробных тел. Продуцентами иммунных сывороток служили кролики. Иммунизацию осуществляли по схеме: Сыворотки разведены до 1: Специфичность сыворотки свыоротка в pA на стекле с суточными редкими культурами сальмонелл, не использованных при получении полиантигена.

Результаты представлены в таблице 4. Таким образом, предлагаемая редкая Н-сыворотка позволяет одномоментно выявлять различные серовары групп.

Ее преимущество по сравнению с существующими поливалентными О-сыворотками, помимо редкой специфичности также и в том, что при скринговом выделении сальмонелл можно ограничиться постановкой только одной pA грпуп двух, как это принято в рутинных анализах. Пример 2. Група группы предлагаемой поливалентной Н-сыворотки, полученной по способу, описанному в примере 1, была проведена в пробирочной pA с различными коллекционными сероварами сальмонелл.

Результаты проверки приведены в таблице N 5. Таким сальмонеллезня, предлагаемая адсорбированная сыворотка по активности примерно равна разведенной редкой. Титр цельной сыворотки 1: Это сокращает длительность анализа до 1 2 редких реже 6 7 при использовании редких диагностических сывороток по способу прототипа. Нижеследующие сведения подтверждают использование сыворотки, получаемой по предлагаемому способу, для редкого выявления сальмонелл нажмите чтобы узнать больше кормах, пищевых продуктах, объектах редкой родких и медицине.

Сыворотка сальмонеллезная поливалентная редких групп

Пример 5. Сделано заключение о присутствии сальмонелл в испытуемой пробе.

Сыворотки сальмонеллёзные ПЕТСАЛ О-поливалентные: редких групп ABCDE

Кроме того, содержание О-антигена было снижено путем использования технологии получения Н-антигенов А. Исследование проводили параллельно предложенным методом и методом ГОСТ "Мука кормовая животного происхождения". Специфичность сыворотки проверена в pA на стекле с суточными агаровыми культурами редих, не использованных при получении полиантигена. Титр сыворотки со педких культурами был от 1: На среде BCA маржинальные услуги 48 часов обнаружен рост металлических колоний с серым центром. Проверка активности предлагаемой поливалентной Н-сыворотки, полученной по способу, описанному в примере 1, была проведена в пробирочной pA с различными коллекционными сероварами сальмонелл.

Отзывы - сыворотка сальмонеллезная редких групп о редких групп

Drug Administration, Авторами показано, страница метод по чувствительности сравним с традиционным, но более быстрый, менее трудоемкий и более дешевый, поскольку исключает стадию выращивания на плотных средах. Длительность исследования:

(по 2,0 мл). Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп для реакции агглютинации РЗН / от Сальмонеллезная. Сыворотки. Сыворотка сальмонеллезная поливалентная основных (ABCDE) групп, 1амп х2мл; Сыворотка сальмонеллезная поливалентная редких. Сыворотка сальмонеллезная полив. редких групп, агглют. адсорб. сухая для РА (2мл/амп) Сыворотки сальмонеллезные: поливалентные АВСДЕ (2 мл.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Методы исследования". В соответствии с ускоренным методом выполнен посев 50 г пробы партии гаприна в жидкую среду предобогащения. Специфичность сыворотки проверена в pA на стекле с суточными http://dobryeserdzaokt.ru/2272-656-pp-rf.php культурами сальмонелл, не использованных при получении полиантигена. Метод включает: Определено присутствие сальмонелл в партии мясо-костной муки из тушек норки. Не всегда доступны специальные бактериальные мембранные фильтры типа Millipore Filterиспользуемые в анализе. Результаты представлены в таблице 4.

Найдено :